Гидролазы

Гидролазы – класс объединяющий ферменты микробов и других живых организмов, являющихся катализаторами реакций расщепления и синтеза белков, жиров и полисахаридов с участие воды[2].


Гидролазы, как и другие ферменты микроорганизмов, синтезируются бактериальной клеткой. Многие гидролазы способны действовать в изолированном от клетки положении. Это имеет огромное практическое значение. Как и другие ферменты, гидролазы, неустойчивы к тепловому воздействию и характеризуются высокой специфичностью действия[1].

Гидролазы - Выявления гликозидаз с помощью сред Гисса
Выявления гликозидаз с помощью сред Гисса


Важнейшие представители гидролаз

К классу гидролаз относят:

  • протеолитические ферменты (пептидгидролазы) – действуют на белки или пептиды;
  • гидролазы глюкозидов – осуществляют каталитическое расщепление углеводов и глюкозидов;
  • липотические эстразы – катализируют расщепление и синтез сложных эфиров (липазы, фосфатазы)[1].
Гидролазы - Реакция питательных сред на воздействие протеаз бактерий
Реакция питательных сред на воздействие протеаз бактерий


Использование гидролаз при идентификации бактерии

Идентификацию бактерий проводят путем изучения ферментов, катализирующих расщепление углеводов и белков[3].

Способность бактерий расщеплять углеводы называют сахаролитическойактивностью[3].

Способность бактерий расщеплять белки называют протеолитическойактивностью[3].

Оба признака выявляют по конечным продуктам расщепления субстратов после посева культуры на питательные среды[3].

При ферментации сахаров выявляется образование различных кислот: молочной, уксусной, муравьиной, или кислоты и газа (водорода или углекислоты)[3].

При распаде белков – образование сероводорода, щелочей, аммиака, индола[3].

Выявление гликозидаз

Гликозидазы выявляют с помощью жидких и полужидких сред Гисса[3].

Жидкие среды Гисса – это пептонная вода, содержащая один из углеводородов (лактоза, глюкоза, мальтоза, сахароза) и индикатор Андреде (кислый фуксин (солянокислый розанилин) C20H20N3Cl, обесцвеченный щелочью). Для улавливания газов в пробирке размещают поплавок (микропробирка вверх дном). Поплавок при стерилизации заполняется средой. Исходный цвет среды является соломенно-желтым. При расщеплении углеводорода до кислоты наблюдается изменение цвета среды на красный. Одновременное образование газа приводит к его накоплению в поплавке. При отсутствии реакции расщепления углеводорода цвет среды не меняется[3].

Полужидкие среды Гисса содержат 0,2%–0,5% мясо-пептонного агара, 1% углеводов и индикатоа ВР (вводно-голубая краска, рзоловая кислота). Исходный цвет среды – розово-серый. При расщеплении углевода среда меняет цвет на голубой. Образование газа приводит к разрывам в среде или появлению пузырьков газа[3].

Установлено, что каждый вид бактерий ферментирует только определенный спектр углеводов. В связи с этим в одних пробирках среда меняет свой цвет, а в других остается не изменой. В результате наблюдается так называемый «пестрый ряд». Таким образом, для каждого вида бактерии характерен свой «пестрый ряд». Это позволяет отличать виды бактерий друг от друга[3].

Выявление протеаз

Протеазы бактерий выявляют посевом чистой культуры на питательные среды: МПЖ (мясопептонный желатин), молочный агар, МПБ (мясопептонный бульон). Результат оценивают исходя из разжижения желатина, разложения козеина молока вокруг колоний или по конечным продуктам распада белков[3].

Отмечается, что различные виды бактерий характеризуются разной формой разжижения желатина. В частности, золотистый стафилококк разжижает желатин в форме воронки, а холерный вибрион – в форме гвоздя[3].

Протеолиз казеина проявляется образованием зон просветления, из-за разложения последнего, вокруг бактериальных колоний[3].

Конечные продукты распада белков различны. В зависимости от вида бактерий это может быть идол, сероводород, аммиак[3].

Обнаружение данных продуктов производят при помощи индикаторных бумажек. Их помещают внутрь пробирки между стенкой и ватно-марлевой пробкой[3].

Индикатор на идол – щавелевая кислота. Пропитанная щавелевой кислотой бумажка при выделении идола становится розовой. Часто тестирование бактериальных культур на образование идола проводиться при помощи реактива Ковача или реактива Эрлиха[3].

Сероводород обнаруживают при помощи ацетата свинца. При выделении сероводорода белый цвет бумажки меняется на черный из-за образования сульфита свинца[3].

Аммиак обнаруживают при помощи лакмусовой бумаги. При выделении аммиака она приобретает синий цвет[3].

 

Оставьте свой отзыв:

Отзывы:

Комментарии для сайта Cackle

Составитель:

 

Страница внесена:

Последнее обновление: 12.04.21 14:50

Статья составлена с использованием следующих материалов:

Литературные источники:
1.

Госманов Р.Г., Галиуллин А.К., Волков А.Х., Ибрагимова А.И. Микробиология: Учебное пособие. — 2-е изд., стер. - СПб.: Издательство «Лань», 2017. — 496 с.

2.

Емцев В. Т. Микробиология: учебник для вузов / В. Т. Емцев, Е. Н. Мишустин – 5-е изд., переработанное и дополненное – Москва: Дрофа, 2005. – 445 с.

3.

Литусов Н.В. Физиология бактерий. Иллюстрированное учебное пособие. – Екатеринбург: Изд-во УГМУ, 2015. – 43 с

Свернуть Список всех источников